破伤风类毒素IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【产品名称】

通用名称：破伤风类毒素IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 

【包装规格】

96人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人血清/血浆或全血样本中的破伤风类毒素IgG抗体。

适用于检测正常或易感人群抗破伤风类毒素IgG抗体水平是否达到完全保护滴度（0.1 IU/ml）以及接种含破伤风类毒素成分疫苗后抗破伤风类毒素IgG抗体水平是否达到免疫成功标准（0.1 IU/ml）。

破伤风杆菌是一种能形成芽孢的严格厌氧杆菌，破伤风是由破伤风梭状芽孢杆菌（破伤风杆菌，Clostridium tetani）引起的感染性细菌性疾病。在厌氧条件下（如被污染的坏死性伤口），这种无所不在的杆菌可产生一种毒性极强的神经毒素 — 破伤风痉挛毒素。破伤风痉挛毒素可阻断中枢神经系统中的抑制性神经递质，引发肌肉强直和痉挛，亦即破伤风的典型表现。

破伤风的潜伏期通常为3~21天（中位数7天，范围0~>60天）。在多数病例中，新生儿破伤风在出生后3~14天即可发病。在超过80%的病例中，破伤风表现为全身性强直性疾病。典型特征则早期表现为面部肌肉痉挛（牙关紧闭和痉笑），继以背肌痉挛（角弓反张）和突发的全身性强直性癫痫（破伤风痉挛）。声门痉挛可诱发猝死。在新生儿破伤风中，全身性痉挛出现前常表现为不能吮吸或接受喂食和过度哭闹。破伤风的病死率在10%~70%之间，视治疗措施、患者的年龄和总体健康而异。老年和婴幼儿患者如不住院和接受加强治疗，死亡率几乎可达100%。在具备最佳医疗条件的医院中，死亡率可降至10%~20%。

破伤风可在任何年龄发病，并且有明显的季节性，其高峰出现在夏季中期或潮湿的季节，即便有了现代加强监护的条件，病例死亡率也非常高。绝大多数破伤风病例与生育相关，多发于发展中国家，主要见于不洁分娩和产后卫生条件较差的新生儿和孕产妇。儿童和成人受伤后发生破伤风也是一个严重的公共卫生问题。

实验室检测破伤风类毒素IgG抗体的方法主要有间接血凝试验、毒素中和抗体实验、酶联免疫实验（ELISA）等。

【检验原理】

试剂盒采用酶联免疫间接法原理。

本试剂盒系用精制的破伤风类毒素抗原包被微孔板。样品加入微孔后，其中抗破伤风类毒素抗体与微孔中固相化破伤风类毒素抗原形成抗原-抗体免疫复合物，洗涤去除未结合物，加入辣根过氧化酶标记小鼠抗人IgG单克隆抗体，与复合物反应形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤去除未参与反应的酶结合物，加TMB底物显色，呈色的深浅与破伤风类毒素IgG抗体的含量成正比。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷冻，有效期为12个月。

2. 未用完的预包被板应立即与干燥剂一起放入自封袋中密封，2~8℃环境中保存时间不得超过一周。

3. 未用完的其他组份试剂应立即将瓶盖盖好，置于2~8℃环境中保存，保存时间不得超过一周。

4. 产品的生产日期及有效期至详见产品标签。

【适用仪器】

含450nm波长的酶标仪或全自动酶免分析仪。

【样本要求】

1. 人血清/血浆或全血均可用作测定样本。抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸钠）对样本检测结果无干扰。

2. 血清/血浆样品2～8℃冷藏保存可稳定4天，但建议在72小时内使用；全血样本即采即用；若需长期保存，血清/血浆样品可直接-20℃冷冻保存可稳定一年，全血样本可用样品稀释液稀释后吸出上清液，-20℃冷冻保存可稳定一年。冻存的样本冻融次数建议不超过3次。

3. 应避免使用溶血、脂血样本，不能使用被污染的样本。

【检验方法】

1.样品准备

1.1 先向1.5ml离心管中加入样品稀释液500μl。编号。

1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血浆5μl，加入相应的离心管中，立即轻摇、混匀。

1.3 若为全血样品，将离心管置室温（或4℃冰箱）静置，待红血球全部沉降到孔底，取上清液检测；若为血清或血浆样品，混匀后即可使用。

2. 将试剂盒和样品从冷藏环境中取出，放置30分钟，平衡至室温；恒温箱或水浴锅调节至37±1℃。

3. 配制洗涤液：1倍体积的浓缩洗涤液加入19倍体积的蒸馏水、纯化水或去离子水，混匀。

4. 加样：每次试验设阳性对照1孔、阴性对照1孔，每孔加入相应的对照液100μl；设空白对照1孔，加样品稀释液100μl；其余每孔加入已稀释的样品（全血样品取上清液）100μl。贴上封口膜，置37℃温育60分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。有条件的可按上述洗涤条件设置参数，用洗板机洗涤。

5. 加抗人IgG抗体酶标记物：每孔100μl（空白孔不加）。贴上封口膜，置37℃温育30分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。

6. 显色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混匀。贴上封口膜，置37℃避光显色15分钟。

7. 测定：小心将封口膜揭掉，每孔加终止液50μl，混匀。30分钟内用酶标仪双波长450nm/630nm测定各孔OD值(使用单波长450nm时，必须以空白孔调零）。

【阳性判断值】

1. 阴性对照OD₄₅₀＜0.3，阳性对照OD₄₅₀≥0.6，试验成立。

2. Cut-Off 值 = 阴性对照OD₄₅₀值 × 2.1

S/CO值 =；

0.9≤S/CO值＜1.1，判为可疑，建议重复检测；

S/CO值≥1.1，判为阳性；

S/CO值＜0.9，判为阴性。

【检验结果的解释】

本试剂盒Cut-off值设定在破伤风类毒素IgG抗体完全保护滴度0.1IU/ml（原始样品）。

1. 阳性结果：提示接种过含破伤风类毒素成分疫苗且已产生抗体，抗体水平不低于0.1IU/ml，达到完全保护滴度。

2. 阴性结果：提示未接种过含破伤风类毒素成分疫苗或含破伤风类毒素成分疫苗接种后产生的抗体水平低于0.1IU/ml，未达到完全保护滴度。

3. 可疑结果：对可疑结果建议重复检测或两周后再次检测，动态观察抗体水平的变化。

【检验方法的局限性】

仅用于人体内破伤风类毒素IgG抗体的定性检测。