腮腺炎病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【产品名称】

通用名称：腮腺炎病毒IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

【包装规格】

96人份/盒

【预期用途】

本产品用于体外定性检测人血清/血浆或全血样本中的腮腺炎病毒IgG抗体。

适用于腮腺炎病毒感染的辅助诊断；含腮腺炎成分疫苗接种后体内腮腺炎病毒IgG抗体检测及正常或易感人群体内腮腺炎病毒IgG抗体检测。

腮腺炎病毒属于副粘病毒科副粘病毒属，仅有一个血清型，根据编码小分子疏水蛋白基因（SH基因）的序列差异可将其分成不同的基因型。病毒为单链RNA病毒，外有来自宿主细胞的脂质膜包绕，病毒表面有两个组分，血凝素-神经氨酸酶蛋白和溶解蛋白，对病毒毒力起着重要作用。血凝素-神经氨酸酶蛋白的抗体具有中和病毒的作用，病毒可在许多细胞包括鸡胚细胞中复制。

腮腺炎初始症状一般为非特异性的，例如肌痛、头痛、不适和低热，1天以内会出现典型的单侧或双侧腮腺肿大，10%的病例可见其它唾液腺明显累及的症状。大约1周以后，发热和腮腺肿胀消退，除非出现并发症，疾病一般会痊愈。约30%的病例仅仅出现非特异性的症状或无症状。2岁以下儿童感染后大多为亚临床型，腮腺肿大前2天到腮腺肿大后9天具有传染性，没有特异性治疗方法。尽管可能出现并发症，腮腺炎一般为轻型的自限性疾病，病死率仅为1/10000。50%～60%的病人可出现脑脊液白细胞增多（>5个/mm³），但没有脑炎/脑膜炎表现；有脑膜炎症状者可达15%。0.02%～0.3%的病例可出现腮腺炎脑炎。虽然腮腺炎脑炎病死率低，但可出现永久性后遗症，如麻痹、惊厥、颅神经瘫痪、导水管狭窄和脑水肿。腮腺炎引起的后天感音神经性聋是儿童期耳聋的主要病因之一，大约会出现在5/10万的腮腺炎患者中。青春期后的男性患腮腺炎后，约20%会出现睾丸炎，其中20%可累及双侧，但腮腺炎继发睾丸炎很少引起不育。有症状的卵巢炎和乳腺炎少见，且不会出现永久性后遗症。怀孕12周内感染腮腺炎，有25%可出现自发性流产，但孕期感染腮腺炎病毒，未见有胎儿畸形的报道。大约4%的病例会并发胰腺炎，但腮腺炎引起的胰腺炎与糖尿病的关系尚不肯定。

一般自然感染后可获得终生保护，但也有腮腺炎复发的报道。鼻咽腔粘膜分泌的IgA抗体具有中和腮腺炎病毒的作用，可被视为第一道防线。腮腺炎的免疫力与血清特异性抗体相关。尚不清楚终生免疫是否必须通过在人群中循环的野病毒对机体免疫系统的自然加强而达到。使用常用的免疫学方法检测血清特异性IgG抗体可证明机体的免疫力。

目前检测腮腺炎病毒特异性的IgG抗体的主要方法有：中和试验、血凝抑制试验、酶联免疫法（ELISA）等。

【检验原理】

试剂盒采用酶联免疫间接法原理。

本试剂盒系用灭活纯化腮腺炎病毒抗原包被微孔板。样品加入微孔后，其中抗腮腺炎病毒抗体与微孔中固相化腮腺炎病毒抗原形成抗原-抗体免疫复合物，洗涤去除未结合物，加入辣根过氧化酶标记小鼠抗人IgG单克隆抗体，与复合物反应形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤去除未参与反应的酶结合物，加TMB底物显色，呈色的深浅与腮腺炎病毒IgG抗体的含量成正比。

【主要组成成份】

【储存条件及有效期】

1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷冻，有效期为12个月。

2. 未用完的预包被板应立即与干燥剂一起放入自封袋中密封，2~8℃环境中保存时间不得超过一周。

3. 未用完的其他组份试剂应立即将瓶盖盖好，置于2~8℃环境中保存，保存时间不得超过一周。

4. 产品的生产日期及有效期至详见产品标签。

【适用仪器】

含450nm波长的酶标仪或全自动酶免分析仪。

【样本要求】

1. 人血清/血浆或全血均可用作测定样本。抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸钠）对样本检测结果无干扰。

2. 血清/血浆样品2～8℃冷藏保存可稳定4天，但建议在72小时内使用；全血样本即采即用；若需长期保存，血清/血浆样品可直接-20℃冷冻保存可稳定一年，全血样本可用样品稀释液稀释后吸出上清液，-20℃冷冻保存可稳定一年。冻存的样本冻融次数建议不超过3次。

3. 应避免使用溶血、脂血样本，不能使用被污染的样本。

【检验方法】

1.样品准备

1.1 先向1.5ml离心管中加入样品稀释液500μl。编号。

1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血浆5μl，加入相应的离心管中，立即轻摇、混匀。

1.3 若为全血样品，将离心管置室温（或4℃冰箱）静置，待红血球全部沉降到孔底，取上清液检测；若为血清或血浆样品，混匀后即可使用。

2. 将试剂盒和样品从冷藏环境中取出，放置30分钟，平衡至室温；恒温箱或水浴锅调节至37±1℃。

3. 配制洗涤液：1倍体积的浓缩洗涤液加入19倍体积的蒸馏水、纯化水或去离子水，混匀。

4. 加样：每次试验设阳性对照1孔、阴性对照1孔，每孔加入相应的对照液100μl；设空白对照1孔，加样品稀释液100μl；其余每孔加入已稀释的样品（全血样品取上清液）100μl。贴上封口膜，置37℃温育60分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。有条件的可按上述洗涤条件设置参数，用洗板机洗涤。

5. 加抗人IgG抗体酶标记物：每孔100μl（空白孔不加）。贴上封口膜，置37℃温育30分钟后，小心将封口膜揭掉，倒掉孔中的液体。每孔加300μl已稀释好的洗涤液，轻微振摇10秒后倒掉，拍干。重复5次。

6. 显色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混匀。贴上封口膜，置37℃避光显色15分钟。

7. 测定：小心将封口膜揭掉，每孔加终止液50μl，混匀。30分钟内用酶标仪双波长450nm/630nm测定各孔OD值(使用单波长450nm时，必须以空白孔调零）。

【阳性判断值】

1.阴性对照OD₄₅₀＜0.3，阳性对照OD₄₅₀≥0.6，试验成立。

2.Cut-Off 值=阴性对照OD₄₅₀值 × 2.1，S/CO值=；

0.9≤S/CO值＜1.1，判为可疑，建议重复检测；

S/CO值≥1.1，判为阳性；

S/CO值＜0.9，判为阴性。

【检验结果的解释】

1. 阳性结果：S/CO值≥1.1，表示样本中腮腺炎病毒IgG抗体为阳性。

2. 阴性结果：S/CO值＜0.9，表示样本中腮腺炎病毒IgG抗体为阴性。

3. 可疑结果：0.9≤S/CO值＜1.1，表示样本中腮腺炎病毒IgG抗体为处于临界值，建议重复检测或两周后再次检测，动态观察抗体水平的变化。

【检验方法的局限性】

仅用于腮腺炎病毒感染的辅助诊断及腮腺炎病毒IgG抗体的定性检测。